二次元電気泳動ギャラリー
このページでは，各種実験動物の臓器について当研究室で得られた二次元電気泳動像をお見せします。
なお，ご質問・ご意見等については左メニューにある連絡先までご連絡ください。
二次元電気泳動の方法
サンプル調製
細胞・組織をReadyPrep™ タンパク抽出キット（Total Protein用; Bio-rad）の液に入れ， ビーズ式破砕機（TyssueLyser; Qiagen)にてホモゲナイズした。 遠沈して上清を回収し，EZQ® Protein Quantification Kit （Invitrogen）にて蛋白質を定量し， ReadyPrep™ 還元アルキル化キット（Bio-rad）により還元アルキル化した後， 二次元電気泳動に供した。
一次元目：等電点電気泳動
得られたサンプル調製液を膨潤サンプルバッファ（Bio-Rad)で希釈し， pH範囲3～10の7cm IPGストリップ（IPG ReadyStrip; Bio-rad）とプロティアンIEFセル（Bio-rad)を用いて等電点電気泳動を行った。
二次元目：SDS-PAGE
IEF後，平衡化バッファIとII（共にBio-rad）にてSDS化および平衡化したのち，SDS-PAGEを行った。 分子量マーカーとして，プレシジョンPlusプロテインスタンダード（アンステインド; Bio-rad）を用いた。
ゲルは以下の２つの方法を適宜用いている。
- 10-20% gradient gel (ReadyGel J; Bio-rad) + Tris Glycine SDS バッファ (Bio-rad）
- 4-12% gradient gel (NuPAGE® Novex BisTris Gel; Invitrogen) + MES バッファー (Invitrogen）
泳動像の記録
泳動後のゲルは，Sypro® Ruby 蛋白質ゲル染色（Invitrogen）にて染色後， レーザースキャナ（FX-Pro; Bio-rad)にて撮影した。画像は，PhotoshopにてWeb用に解像度を下げてjpegファイルを作成した。
二次元電気泳動写真集
精巣
AKR マウス精巣
サンプル： RNAlater ® 保存した成熟雄精巣
C57BL/6J マウス精巣
サンプル： RNAlater ® 保存した成熟雄精巣
DBA/1 マウス精巣
サンプル： RNAlater ® 保存した成熟雄精巣
精子
C57BL/6Cr マウス精巣上体精子
サンプル： 成熟雄精巣上体精子を直接膨潤サンプルバッファへ投入後，二次元電気泳動した。
卵巣
C57BL/6Cr マウス卵巣
サンプル： RNAlater ® 保存した4週齢雌卵巣（Zeba™ desalt spin column（Pierce）にてバッファー交換後泳動）
C57BL/6Cr マウス卵巣 （PMSG処理後48時間）
サンプル： Allprotect Tissue Reagent （Qiagen） 保存した4週齢雌卵巣
AllPrep DNA/RNA/Protein Mini Kit（Qiagen）により蛋白質を抽出；IEF前の還元アルキル化処理無し
A/J マウス卵巣
サンプル： RNAlater ® 保存した4週齢雌卵巣（Zeba™ desalt spin column（Pierce）にてバッファー交換後泳動）
DBA/1 マウス卵巣
サンプル： RNAlater ® 保存した4週齢雌卵巣（Zeba™ desalt spin column（Pierce）にてバッファー交換後泳動）
DBA/2 マウス卵巣
サンプル： RNAlater ® 保存した4週齢雌卵巣（Zeba™ desalt spin column（Pierce）にてバッファー交換後泳動）
DBA/2 マウス卵巣 （PMSG処理後48時間）
サンプル： Allprotect Tissue Reagent （Qiagen） 保存した4週齢雌卵巣
AllPrep DNA/RNA/Protein Mini Kit（Qiagen）により蛋白質を抽出；IEF前の還元アルキル化処理無し
C3H/He マウス卵巣
サンプル： RNAlater ® 保存した4週齢雌卵巣（Zeba™ desalt spin column（Pierce）にてバッファー交換後泳動）
BDF1 マウス卵巣
サンプル： RNAlater ® 保存した4週齢雌卵巣（Zeba™ desalt spin column（Pierce）にてバッファー交換後泳動）
BDF1 マウス卵巣 （PMSG処理後48時間）
サンプル： Allprotect Tissue Reagent （Qiagen） 保存した4週齢雌卵巣
AllPrep DNA/RNA/Protein Mini Kit（Qiagen）により蛋白質を抽出；IEF前の還元アルキル化処理無し
SD ラット卵巣
サンプル： RNAlater ® 保存した非妊娠成熟雌の卵巣（性周期は観察していない）
卵子
BDF1マウス排卵卵子
サンプル：過排卵処理で得られたBDF1マウス排卵卵子（直接膨潤サンプルバッファへ投入後，二次元電気泳動した）
BDF1マウス体外成熟卵子
サンプル：21日齢雌BDF1マウスより得た体外成熟卵子（直接膨潤サンプルバッファへ投入後，二次元電気泳動した）
C57BL/6Cr マウス体外成熟卵子
サンプル：21日齢雌C57BL/6Crマウスより得た体外成熟卵子（直接膨潤サンプルバッファへ投入後，二次元電気泳動した）
分子マーカーは Mark12™ Wide Range Unstained Standard (Invitrogen)を使用。
DBA/2 マウス体外成熟卵子
サンプル：21日齢雌DBA/2マウスより得た体外成熟卵子（直接膨潤サンプルバッファへ投入後，二次元電気泳動した）
ICR マウス体外成熟卵子
サンプル：21日齢雌ICRマウスより得た体外成熟卵子（直接膨潤サンプルバッファへ投入後，二次元電気泳動した）
肝臓
C57BL/6J マウス肝臓
サンプル： RNAlater ® 保存した成熟雄の肝臓
AKR マウス肝臓
サンプル： RNAlater ® 保存した成熟雄の肝臓
心臓
C57BL/6Cr マウス心臓
サンプル： -80°C保存した成熟雄の心臓
JW ウサギ心室
サンプル： フナコシより購入した凍結心臓
Hartley モルモット心室
サンプル： フナコシより購入した凍結心臓
SD ラット心室
サンプル： フナコシより購入した凍結心臓
シリアンハムスター心室
サンプル： RNAlater ®保存した成熟雌心臓
骨格筋
C57BL/6Cr マウス大腿筋
サンプル： -80°C保存した成熟雄の大腿筋
分子マーカーは ECL Dual-Vue Western Blotting Marker (GE Healthcare)を使用。
腎臓
C57BL/6J マウス腎臓
サンプル： RNAlater ® 保存した成熟雄の腎臓
尿
BDF1 マウス尿
サンプル： 未成熟雌の尿 （IEF前の還元アルキル化処理無し）
肺
C57BL/6J マウス肺
サンプル： RNAlater ® 保存した成熟雄の肺
脾臓
C57BL/6J マウス脾臓
サンプル： RNAlater ® 保存した成熟雄の脾臓
胸腺
C57BL/6J マウス胸腺
サンプル： RNAlater ® 保存した成熟雄の胸腺
大脳
C57BL/6J マウス大脳
サンプル： RNAlater ® 保存した成熟雄の大脳
小脳
C57BL/6J マウス小脳
サンプル： RNAlater ® 保存した成熟雄の小脳
